一、操作步驟
1.組織 4℃ 條件下從醫(yī)院取回。
2.消毒取樣的 15ml 管，取出組織，放到 10ml 大皿中。
3.用含 4 抗的 PBS 溶液浸泡，清洗組織。
4.再用組織緩沖液浸泡、清洗三遍。
5.將組織剪成 1mm3 大小的組織塊，轉(zhuǎn)移到 15ml 管中消化。
6.在 37℃ 水浴鍋中，消化 15min。
7.取少量液體在顯微鏡下觀察，看到較多的單細(xì)胞和較少的細(xì)胞簇后，終止消化。
8.用 100μm 篩過(guò)濾，然后 300g4℃ 離心 5min，移去上清。
9.重懸沉淀，轉(zhuǎn)移到 2ml 離心管中，300g4℃ 離心 5min，移去上清。
10.估算沉淀的細(xì)胞量，以 1:25 的比例添加基質(zhì)膠，重懸。
11.24 孔板鋪板，冰上操作，每孔點(diǎn)膠 25ul。
12.鋪板后，放到 37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)箱中 15min 成膠。
13.然后每孔添加 600ul 結(jié)直腸癌類(lèi)器官培養(yǎng)基，放到 37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
二、結(jié)果展示
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